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基因敲除(CRISPR/Cas9)

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詳細介紹Detailed Introduction

基因敲除CRISPR/Cas9

       技術原理
      1、多靶標串聯技術
       Biowalk技術:可實現無限連續無縫的多靶標串聯,方便快捷。
       tRNA組裝:只需一個啟動子同時驅動多個tRNA(77bp)+20bp spacer+gRNA單元,操作簡單,費用低。

       2、CRISPR技術
       基因敲除可作用物種:水稻,煙草、擬南芥、油菜、甘藍、番茄、玉米,以及不常見物種的crispr載體構建。
       CRISPR/Cas9 是細菌和古細菌在長期演化過程中形成的一種適應性免疫防御,此系統的工作原理是 crRNA( CRISPR-derived RNA )通過堿基配對與 tracrRNA (trans-activating RNA )結合形成 tracrRNA/crRNA 復合物,此復合物引導核酸酶 Cas9 蛋白在與 crRNA 配對的序列靶位點剪切雙鏈 DNA。而通過人工設計將這兩種改造形成具有引導作用的sgRNA (singleguide RNA ),引導 Cas9 對 DNA 的定點切割。當植物的基因組被切割后,在有同源序列的情況下會發生同源重組修復,此種情況下可以產生基因組定點修改(Knock in);在沒有同源序列的情況下細胞會進行隨機修復,此時在基因組上會隨機引入插入、缺失、替換事件,從而造成基因敲除(Knock out)。

       實驗目的
       首先可用于未知基因功能研究,通過使基因功能缺失的方式觀察該基因對應功能以及表型。其次用于已知功能基因的應用,通過剔除已知基因的功能產生具有特定特性的新品種。

      實驗流程和周期
      客戶在線下單 — 訂單/實驗材料確認 — 靶點預測 — 靶點效率評估— 基因敲除載體構建 — 遺傳轉化 — 測序鑒定 — 目標基因敲除株【實驗周期約3個月】

      優勢特點
      1. 基于CRISPR/Cas9技術的基因敲除成本低、效率高、方便快捷;
      2. 伯遠生物自主設計的靶點效率評估系統,可以在兩天之內完成待選靶點體內實驗評估,然后選出高效靶點構建轉基因載體,保證一次敲除的成功率;
      3. 與伯遠生物高效轉基因平臺無縫對接,可作用的物種廣泛:水稻(粳稻、秈稻、野生稻等)、煙草(K326、Tn90、紅花大金元、本氏煙等)、擬南芥等;
      4. 多基因敲除,可以一次對5個以上的基因輕松敲除。

     客戶下單
     下單流程:注冊成為用戶,登錄客戶端進行下單。

      項目信息填寫:
      1. 客戶按照頁面提示填寫項目名稱,選擇項目類型[基因組編輯(Cas9)],填寫個人信息及聯系方式進行預提交;
      2. 提交項目所需要的具體信息,包括:目標基因ORF及對應基因組信息、選擇敲除的目標物種以及靶點數量,填寫完畢后價格由系統自動計算生產。
     實驗信息
     在實驗開始及結題關鍵節點系統會自動發短信到申請人手機進行告知,實驗過程中客戶可以隨時登錄管理系統查看項目實時進展情況。實驗結題后,實驗報告,檢測結果可在線查看,并永久保留。實驗過程用到的菌株載體免費為客戶保存半年后銷毀。
     實驗結果
    1. 基因敲除載體的圖譜、全序列和注釋信息;
    2. 各靶點的敲除效率的統計數據;
    3. 每個敲除系的測序結果;
    4. 測序驗證已經敲除了目標基因的敲除株系(粳稻每個基因不低于8株,秈稻每個基因不低于3株);
    5. 實驗報告。


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