服務熱線:027-58906509/18140670612 QQ 注冊/登錄

基因敲除(CRISPR/Cas9)

.

詳細介紹Detailed Introduction

基因敲除CRISPR/Cpf1

  技術原理

  1、多靶標串聯技術

  Biowalk技術:可實現無限連續無縫的多靶標串聯,方便快捷;

  tRNA組裝:只需一個啟動子同時驅動多個tRNA(77bp)+20bp spacer+gRNA單元,操作簡單,費用低。

  2、 CRISPR技術

  大片段的刪除;micRNA的編輯;lncRNA的編輯;單/多基因編Crispr/cpf1的作用原理和crispr/cas9作用原理是一致的,Cpf1通過自身加工前體crRNA,隨后利用加工的crRNA特異性地靶向和切割DNA。詳述如下:

  第一為適應階段,首次入侵的外源 DNA 的前間隔序列 (Protospacer) 被古菌或細菌中Cas 蛋白獲取,并作為間隔序列 (Spacer) 插入CRISPR 中的兩段重復序列之間。

  第二為表達階段,外源 DNA 再次入侵時,細菌開始轉錄CRISPR,形成初級轉錄產物pre-crRNA,再由核糖核酸酶或 Cas 蛋白在重復序列位點內切割形成成熟的 crRNA。

  第三為干擾階段,成熟的 crRNA 與特異的CRISPR 效應蛋白形成核糖核蛋白復合體,識別并切割能與crRNA 互補配對的外源 DNA,造成雙鏈 斷裂,激活細胞的非同源末端連接NHEJ 或同源重組HR兩種修復機制,從而實現基因的敲除、插入或修飾 CRISPR/Cpf1 屬于 2 類Ⅴ型 CRISPR 系統,Cpf1有Fncpf1、Lbcpf1、Ascpf1 ,我司使用的是Lbcpf1。

    優勢特點

 1.Cpf1 的分子量比 Cas9 小,便于進入受體細胞,編輯成功率會提高

    2.Cas9需要2個RNA分子協助,Cpf1只需要一個RNA分子

    3.Cpf1 剪切 DNA 所需的 crRNA 長度僅為 42−44 nt,因此設計步驟可以顯著簡化,同時降低了將 CRISPR/Cpf1 系統遞送至編輯對象的難度

    4.Cpf1 識別的PAM序列與 Cas9不同,極大地擴寬了 CRISPR 系統基因組編輯的靶點范圍,尤其是富含 AT 的基因組

    5.Cas9 切割 DNA 形成一個平末端;而Cpf1切割DNA形成一個有5個核苷酸突出的黏性末端,可促進目的基因通過非同源重組的方式插入靶定位點。

  客戶下單
  下單流程:注冊成為用戶,登錄客戶端進行下單。
  項目信息填寫
  客戶按照頁面提示填寫項目名稱,選擇項目類型[基因組編輯(Cas9)],填寫個人信息及聯系方式進行預提交;
  提交項目所需要的具體信息,包括:目標基因ORF及對應基因組信息、選擇敲除的目標物種以及靶點數量,填寫完畢后價格由系統自動計算生產。

  實驗信息
  在實驗開始及結題關鍵節點系統會自動發短信到申請人手機進行告知,實驗過程中客戶可以隨時登錄管理系統查看項目實時進展情況。實驗結題后,實驗報告,檢測結果可在線查看,并永久保留。實驗過程用到的菌株載體免費為客戶保存半年后銷毀。

  實驗結果
  基因敲除載體的圖譜、全序列和注釋信息;
  各靶點的敲除效率的統計數據;
  每個敲除系的測序結果;
  測序驗證已經敲除了目標基因的敲除株系(粳稻每個基因不低于8株,秈稻每個基因不低于3株);

  實驗報告。


如果您覺得本站還不錯,就請分享給身邊的好友吧


分享成功還有機會獲得精美禮品哦

撥打電話 真人情色漫画