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RACE技術服務

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詳細介紹Detailed Introduction

 RACE技術服務

      實驗原理
      RACE即cDNA末端快速克隆技術。先由RT-PCR從RNA中獲取cDNA片段,再通過設計引物與PCR向兩端延伸擴增從而獲得完整的3'端或5'端序列,是一種從低豐度的轉錄本中快速擴增cDNA的5'和3’末端的有效方法。

       實驗目的
       獲得未知基因完整的3'端或5'端序列,找到完整的ORF開放閱讀框,實現基因的正常編碼。
       實驗周期和流程
       客戶在線下單-訂單信息/實驗材料確認-引物設計-PCR擴增-測序分析-獲得完整的ORF閱讀框

       優勢特點
     (1)詳細的鑒定報告
     (2)快速的實驗周期

       客戶下單
      項目信息填寫:

      1.客戶按照提示填寫項目名稱、選擇項目類型、填寫個人信息及聯系方式進行預提交;
      2.序列信息:大于200bp的已知序列(請注明已知序列的5’端及3’端):如果已知序列比較短,建議先進行3’RACE再進行5’RACE,以提高實驗的成功率。
      3.實驗數據和相應的參考文獻:這將會幫助我們更好地理解您的實驗背景,更有利于實驗的順利進行。
       注:1. 請您保證材料或者總RNA新鮮,如果基因的含量較低或者未知序列較長,樣品量需相應增加。
       2. 我們會根據已知序列進行特異性預擴增,如果得不到目的序列或為非目的基因的序列,我們將停止實驗并收取實驗成本費用;如果得到序列與您提供的序列有個別堿基不符,我們在征求您的意見后決定是否進行RACE實驗。

       實驗信息
       實驗過程中客戶可以隨時登入管理系統查看項目實時進展情況。實驗結題時系統會通過短信自動通知客戶,并發送實驗報告查看地址。實驗結題后,實驗報告,檢測結果可在線查看或打印,并永久保留。

       實驗結果
     (1)實驗報告:引物信息、實驗過程、PCR產物凝膠圖片、最終的完整ORF序列。
     (2)測序結果:實驗相關的測序文件。



圖1

       利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作為一個引物結合位點,以連有SMART寡核苷酸序列通用接頭引物的Oligo(dT)30MN作為鎖定引物反轉錄合成標準第一鏈cDNA。然后用一個基因特異引物作為上游引物,用一個含有部分接頭序列的通用引物作為下游引物,以cDNA第一鏈為模板,進行PCR循環,把目的基因3' 末端的DNA片段擴增出來.(圖1)

圖2

       利用一條基因特異性反轉錄引物,在反轉錄酶的作用下合成cDNA第一鏈,將RNA-DNA雜合鏈中的RNA降解純化后,利用末端轉移酶在cDNA鏈的3’端加入PolyC尾巴,然后利用錨定引物和一條基因特異性引物擴增。(圖2)


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