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高通量點突變

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詳細介紹Detailed Introduction

高通量點突變(體外)

  實驗原理
       點突變是基因功能恢復和研究氨基酸在蛋白中功能的重要手段,本公司點突變是利用專利技術MultiMutTM技術,與常規的突變每次只能突變一個位點不同,可以方便的一次性對DNA上多個指定位點進行突變或回復突變。也可以對多個位點同時進行隨機突變,以便研究多個關鍵位點隨機組合后的蛋白功能變化,可以快速的建立多個位點隨機突變的蛋白突變體庫。為體外蛋白進化研究提供了高效解決方案。

       實驗用途
       1. 消除DNA序列上的特別位點,如酶切位點、終止位點等;
       2. 密碼子同意突變,觀察密碼子改變對翻譯效率的影響;
       3. 突變氨基酸序列分析氨基酸改變對蛋白性能的影響。
  實驗流程和周期
  客戶在線下單 — 訂單/實驗材料確認 — CloneCAD實驗設計 — 突變實驗  【實驗周期:提交訂單時根據具體實驗難度系統自動計算】
  優勢特點
  1. 多個位點一次性突變;
  2. 多個位點同時隨機突變
  3. 實驗周期:10個工作日左右
  4. 可隨時查看項目實時進展情況 。
  客戶下單
  下單流程:注冊成為用戶,登錄客戶端進行下單。
  項目信息填寫:
  1. 客戶按照頁面提示填寫項目名稱,選擇項目類型[高通量點突變],填寫個人信息及聯系方式進行預提交;
  2. 提交項目所需要的具體信息,包括:目標基因突變之前的基因序列,突變后的基因序列,基因名稱等注釋信息,如果特別要求請在備注中注明。填寫完畢后價格由系統自動計算生成。如果客戶需要進行后續轉基因實驗載體構建完畢后可以一鍵生成轉基因項目。
  實驗信息
  實驗過程中客戶可以隨時登錄管理系統查看項目實時進展情況。實驗結題時系統會通過短信自動通知客戶,并發送實驗報告查看地址。實驗結題后,實驗報告,檢測結果可在線查看或打印,并永久保留。實驗過程用到的菌株、載體、受體材料免費為客戶保存半年后銷毀。
  實驗結果
  1. 構建好的載體圖譜、全序列和注釋信息;
  2. 構建部位的測序結果;
  3. 構建好的載體及其保存菌株。
  實驗案例
  對GUS基因同時進行6點突變,一次性全部成功。

       

  MultiMut突變效果檢測,對1.6kb gus基因上進行6個點進行不同類型的突變(上),突變后的片段克隆到突變載體進行轉化大腸桿菌,然后進行菌液PCR鑒定,約75%的為目標克隆(中),隨機去6個克隆進行測序,結果顯示每個克隆的6個點全部實現了正確突變,突變成功率100%。


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